EA0204 RT-LAMP Colorimetric Master kit (Red to Yellow)

产品简介

本产品是pH敏感的RT-LAMP反应混合液（LAMP：环介导等温扩增反应）。该预混液经过优化，在特殊 Low Salt buffer 中加入缓冲液、显色染料、Bst DNA聚合酶、逆转录酶、Mg2+和dNTP等组分。

在LAMP的反应过程中，Bst DNA聚合酶发挥聚合作用，改变质子数量进而改变pH值，使红色反应液变成黄色，整个反应过程快速，颜色改变清晰，肉眼可区分。使用时只需要引物混合并加入样品，恒温反应，在20-45分钟内就可以用肉眼读取阳性扩增的结果。

产品规格

保存条件

干冰运输，请注意避免反复冻融。-20 ℃储存，长期储存放置-80 ℃，有效期6个月。

实验流程

1. 本产品在-20 ℃取出后会有轻微沉淀物，需室温解冻混匀至沉淀消失，离心后使用。

2. 按以下组分配置反应混合液

轻轻混匀并离心。

*引物终浓度推荐：1.6 μM FIP/BIP，0.4 μMLF/LB，0.2 μMF3/B3。

**模板加入量在1-5 μL内调整，推荐用水稀释模板，因该试剂对pH十分敏感，应避免使用Tris等缓冲体系稀释模板导致体系pH改变，使阳性反应无法产生变色反应。

3. 置于PCR仪65 ℃反应，45 min（热盖温度105 ℃），85 ℃灭活5 min。

注：

1）本试剂盒所用酶对温度非常敏感，强烈建议使用 PCR 仪操作；如 用水浴锅，应先加热使其达到规定温度后再反应。温差过大，将导致扩增效率降低，使阳性反应无法在说明书规定的时间内红色变成黄色。

2）阴性对照推荐设置空白（不加模板）对照以及 NTC（一般为水）对照。

结果判读：

1. 实验结束后，立刻取出反应管，室温静置5分钟后观察结果。置于光线良好的环境中观察（建议使用白色作为背景），如反应液颜色为黄色则判定为阳性，反应液颜色为紫红色则判定为阴性，反应液颜色为橙黄色则判定为弱阳性。

2. 实验结束后禁止将反应管盖打开，防止出现气溶胶污染。

3. 反应的时间必须准确计时，超过说明书规定的反应时间可能会出现假阳性。

注意事项

1. 试剂配制和模板加入的操作在不同区域进行，以免造成环境的 污染，影响后续实验。

2. 分装后的试剂应避免长时间暴露于空气中。

3. 红黄变色反应依赖反应体系的pH变化，请不要使用含高浓度 Tris的核酸保存溶液，建议使用水保存。

应用实例

扩增Bacteriophage RNA灵敏度测试