EA0205 RT-LAMP Fluorescent Master Mix（Liquid）
产品简介
LAMP 是一种新型核酸扩增技术。采用4或6条能够识别目的基因上的6个特异区域的引物, 依赖与Bst DNA聚合酶的强链置换活性，在30-60分钟内DNA扩增可达109-1010倍。
2 × RT-LAMP Master Mix with Dye 用于模板RNA的检测，提供快速一步法的解决方案。该预混液采用Bst DNA聚合酶的优化配方，可快速地进行环介导等温扩增（LAMP）反应。该预混液包含RT-Enzyme Mix、dNTP、荧光染料和反应Buffer在内的所有必需组分， 只需加入用于等温扩增的引物和模板，进行实时荧光检测。即可在30-45 min内得到扩增结果。
产品规格
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名称 |
规格（100T） |
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2 × RT-LAMP Master Mix with Dye |
0.625 mL × 2 |
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RT-Enzyme Mix |
100 μL |
保存条件
干冰运输，请注意避免反复冻融。-20 ℃储存，长期储存放置-80 ℃，有效期6个月。
实验流程
1. 本产品在-20 ℃取出后会有轻微沉淀物，需室温解冻混匀至沉淀消失，离心后使用。
2. 按以下组分配置反应混合液
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组分 |
单次反应体积 |
终浓度 |
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2 × RT-LAMP Master Mix with Dye |
12.5 μL |
1 × |
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RT-Enzyme Mix |
1 μL |
/ |
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10 × Primer Mix* |
2. 5 μL |
1 × |
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模板RNA* |
X μL |
1 fg-100 ng |
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RNase free water |
补充至25 μL |
/ |
轻轻混匀并离心。
*引物终浓度推荐：1.6 μM FIP/BIP, 0.4 μMLF/LB, 0.2 μMF3/B3。
3. 置于荧光定量仪65 ℃反应，每分钟收集一次荧光信号，设置 35-40 cycles。
4. 热失活条件 85 ℃反应5-10 min。
(在LAMP反应结束后一般禁止将反应盖打开，如后续进行电泳等开盖操作，务必进行热失活操作，以防气溶胶污染)
注意事项
1. 建议每次实验增加无模板阴性对照。
2. 建议试剂配制和模板加入的操作在不同区域进行，以免造成环 境的污染，影响后续实验的进行。
3. 为了保证重复良好的结果，建议模板RNA最后加入。
应用实例
图：本试剂盒检测猪乙脑灭活RNA疫苗的灵敏度。RNA模板加入量从左到右分别是：300 pg、30 pg、3pg、300 fg、30 fg、3 fg
