EB0201 Bst DNA Polymerase
产品简介
Bst DNA聚合酶是Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶I，改进了等温扩增性能及反转录活性的大片段同源物。Bst DNA聚合酶具有对DNA或RNA模板的5’→3’聚合酶活性和强链置换活性，但没有5’→3’和3’→5’核酸外切酶活性。Bst DNA聚合酶具有在高浓度DNA扩增抑制剂中扩增的强大性能，而且反转录酶的活性也显著增强。
产品规格
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名称 |
规格 |
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Bst DNA聚合酶（Bst DNA Polymerase） |
250 U/μL, 100 μL 10 U/μL, 100 μL |
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2 × Bst Reaction buffer |
1mL |
保存条件
干冰运输，请注意避免反复冻融。-20 ℃储存，长期储存放置-80 ℃，有效期1年。
适用范围
等温扩增（LAMP或RT-LAMP）；
链置换DNA扩增反应；
耐高温反转录（高达72 ℃）；
扩增能力强，可在扩增抑制剂或不纯样本中扩增。
酶活定义
1单位（U）指65 ℃条件下反应30 min，能使25 nmol的dNTPs掺入酸不溶物所需的酶量。
失活条件
85 °C反应5 min失活。
质量控制
蛋白纯度
使用分子排阻高效液相检测重组酶纯度。
核酸外切酶残留
20 μL反应体系，20 U本品和0.6 μg λ-Hind III在37 ℃下孵育3 h，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留
20 μL反应体系，20 U本品和0.6 μg λDNA，37 ℃温育3 h，DNA
的电泳谱带无变化。
核糖核酸酶残留
20 μL反应体系，20 U本品和2 μg RNA在37 ℃下孵育1 h，
RNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌DNA残留
20 μL体系中，以本品为模板，扩增E.coli 16 s rDNA基因，30个循环内，无扩增。
实验流程
1. 按照以下组分配置 LAMP 等温扩增反应液，建议反应体系：
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组分 |
体积 |
终浓度 |
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2 × Bst Reaction buffer |
12.5 μL |
1 × (含6 mM MgSO4) |
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Bst DNA聚合酶(10 U/μL) |
0.6-1 μL |
0.24-0.4 U/μL |
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Primer Mix (10x)* |
2.5 μL |
1 × |
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模板DNA或RNA |
2 μL |
1 pg-0.5 μg |
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20 × Eva green |
0.5 μL -1 μL |
0.4 ×-0.8 × |
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RNase Free Water |
Up to 25 μL |
N/A |
*引物终浓度推荐：1.6 μM FIP/BIP，0.4 μM LF/LB，0.2 μMF3/B3。
2. 混匀，离心数秒，置于定量仪65 ℃反应，每分钟收集一次荧光信号，设置35-45 cycles，85 ℃, 5 min灭活。
3. 如果实验需要，可以在2%琼脂糖凝胶进行电泳分析条带。
应用实例
酶活稳定性实验
图1. Bst DNA Polymerase加速稳定性 (4℃) 。酶加量: 10U和5U反应。
结论：该酶在4℃放置21d，酶活不受影响。
图2. Bst DNA Polymerase冻融稳定性。酶加量: 10U和5U反应。
结论：该酶反复冻融60次，酶活不受影响。
图3. Bst DNA Polymerase加速稳定性（37℃）。酶加量: 10U和5U反应。
结论：该酶在37℃放9d，酶活不受影响。超过9d酶活开始下降。
