EB0502 LbCas12a
产品简介
目前为止已发现6种类型和超过20种的CRISPR-Cas系统亚型。 其中，CRISPR-Cas12a是第二类（V型）用于编辑哺乳动物基因组的CRISPR-Cas系统。Cas12a具有独特的功能，可以与CRISPR-Cas9系统进行互补。Cas12a ( Cpf1) 蛋白具有类似于Cas9的RuvC内切核酸酶结构域。
此外，Cpf1不具有HNH内切酶结构域，并且Cas12a的N-末端不具有Cas9的α-螺旋识别叶。Cas12a执行剪切后的DNA双链断裂引入了4或5个核苷酸突出的粘性末端。
研究表明，LbCas12a-crRNA复合物与互补单链DNA或者双链DNA的结合释放出强大的非特异性ssDNA反式切割活性，这促使Cas 12a可以作为一种新型的基因检测和成像的工具。
产品特点
LbCas12a (又名LbCpf1)一种由crRNA单独引导的DNA核酸内切酶，来源于Lachnospiraceae bacterium 菌株，大肠杆菌重组表达获得。
LbCas12a与Cas9需要富含G的PAM相反，通过识别富含T（5'-TTTN-3'）的PAM基序来切割靶DNA。
LbCas12a比Cas9小，且LbCas12a不需要tracrRNA，只需要crRNA较小的crRNA分子（接近Cas9的总sgRNA的一半），非常有利于基因组编辑；
产品规格
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名称 |
R包装 |
L包装 |
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LbCas12a Nuclease |
10 pmol/μL, 10 μL |
10 pmol/μL, 100 μL |
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10 × LbCas12a Reaction Buffer |
1 mL |
1 mL |
质量控制
蛋白纯度
高效液相色谱（SEC-HPLC）和SDS-PAGE检测，纯度≥95%。
核酸外切酶残留
20 μl反应体系，10pmol本品和0.6 μg λ-Hind III在37 ℃下孵育3小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留
20 μl反应体系，10 pmol本品和0.6μg λDNA在37℃温育3 h，DNA的电泳谱带无变化。
RNase残留
20 μl反应体系，10 pmol本品和2 μg RNA在37℃下孵育1h，
RNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌DNA残留
20μl体系中，以本品为模板，扩增 E. coli 16 s rDNA 基因，30个循环内，无扩增。
适用范围
非病毒载体CRISPR基因编辑；
体外靶DNA的特异位点切割；
新型基因检测和成像等。
保存条件
＜0 ℃运输；-20℃储存，长期储存于-80 ℃，避免反复冻融。
在-20 ℃条件下有效期12个月。
建议使用方法
1. LbCas12a的crRNA序列设计参考如下：
5′–AAUUUCUACUAAGUGUAGAUNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN–3′。
其中，LbCas12a的crRNA包含直接重复序列 (DR区，又名Scaffold区，下划线表示)，以及长度为20 nt-35nt与特异靶标序列互补配对的引导序列 (Spacer区，蓝色字体表示)。
2. 反式剪切实验，建议反应体系：
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组分 |
体积 |
终浓度 |
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10 × LbCas12a Reaction Buffer |
2 μL |
1 × |
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10 μM LbCas12a Nuclease |
0.05-0.5 μL |
25-250 nM |
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2 μM crRNA |
1-10 μL |
100-1000 nM |
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Target DNA* |
2 μL |
/ |
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10 μM ssDNA Reporter |
1 μL |
500 nM |
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RNase Free Water |
UP to 20 μL |
N/A |
*Target DNA可为ssDNA或带PAM序列的dsDNA。
3. 实时荧光定量PCR仪检测荧光信号，37 ℃反应，每30 sec采集一次荧光信号。
应用实例
