EB0506 LwaCas13a
产品简介
LwaCas13a（又名 C2c2）属于Ⅱ类Ⅵ型CRISPR系统效应蛋白，具有crRNA介导的RNA内切酶活性。在靶标单链RNA存在PFS序列的情况下，可特异性地切割靶标RNA。通过设计两端标记荧光基团或者其他标记物的RNA探针，可实现CRISPR/Cas13a对RNA模板的检测和信号放大。可通过荧光仪或试纸观察结果。
此外，Cas13a 还具有依赖于靶标单链 RNA 的反式切割活性（即旁路切割活性）。当 LwaCas13a 蛋白与crRNA、靶标RNA结合形成三元复合物后，便会被激活针对非特异序列单链RNA的反式剪切活性，将体系中的任意序列单链RNA切碎，可用于开发靶标核酸的快速检测试剂盒。
产品规格
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名称 |
R包装 |
L包装 |
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LwaCas13a Nuclease |
10 pmol/μL, 10 μL |
10 pmol/μL, 100 μL |
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10 × LwaCas13a Reaction Buffer |
1 mL |
1 mL× 2 |
保存条件
＜0 ℃运输；-20℃储存，长期储存于-80 ℃，避免反复冻融。
在-20 ℃条件下有效期1年。
产品特点
采用一步法纯化制备，最大程度保留酶活性，经过测试酶活性显著高于同类产品。
质量控制
蛋白纯度
高效液相色谱（SEC-HPLC）和SDS-PAGE检测，纯度≥95%。
核酸外切酶残留
20 μL反应体系，10 pmol本品和0.6 μg λ-Hind III在37 ℃下孵育3小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留
20 μL反应体系，10 pmol本品和0.6 μg λDNA在37 ℃温育3 h，DNA的电泳谱带无变化。
RNase残留
20 μL反应体系，10 pmol本品和2 μg RNA在37 ℃下孵育1 h，RNA的电泳谱带不发生变化。
建议使用方法
1. LwaCas13a的crRNA序列设计参考如下：
5’-GAUUUAGACUACCCCAAAAACGAAGGGGACUAAAACNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN-3’
其中，5'-Direct Repeat region (长度36nt，直接重复区，下划线表示) + Spacer region (长度25-35nt，靶标结合区，蓝色字体表示）-33。
*Cas13a切割靶标ssRNA需要特定5'-A/T/U-3’的PFS.（protospacer flanking sequence）。
2. 反式剪切实验，建议反应体系：
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组分 |
体积 |
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10 × LwaCas13a Reaction Buffer |
2 μL |
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靶标ssRNA (500 nM) |
1 μL |
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crRNA (500 nM) |
2-8 μL |
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ssRNA reporter (10 μM) |
0.5 μL |
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LwaCas13a Nuclease |
1-6 pmol |
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RNase Free Water |
UP to 20 μL |
37 ℃每 30-60 s 收集一次荧光，80-99 cycles。
注意事项
1. 为防止 RNase 污染，请保持实验区干净整洁，操作时需穿戴干净的手套、口罩，实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase-free。
2. Cas13a 酶对热敏感，容易失活，应全程冰上配置反应体系，并在使用后立即将酶置于-20 ℃保存。
3. 为了保证反应的正常进行，需使用高质量的 RNA 模板。
应用实例
LwaCas13a Nuclease 切割 ssRNA 灵敏度检测
